بررسی پلی مورفیسم ژن گیرنده شبه تول 4 (tlr4) درسلول های خونی سگهای نژاد تریر مبتلا به درماتیت آتوپیک

درماتیت آتوپیک سگ ها (cad) یک بیماری پوستی آلرژیک با زمینه ژنتیکی می باشد که سبب خارش شدید و آماس پوست می شود و در نژاد تریر شایع می باشد. cad متعاقب تخریب سد اپیدرمی و تماس تسهیل شده آلرژن با سلول های عرضه کننده آنتی ژن پوست (سلول های لانگرهانس) آغاز می شود و در ادامه سبب القا مسیر آماسی وابسته به tlr4 می شود. هدف این مطالعه بررسی پلی مورفیسم ژن tlr4 در سطح نوکلئوتید ها (snp) در مبتلایان به cad می باشد. در مطالعه ی حاضر از 12 سگ تریر مبتلا به cad مراجعه شده به بیمارستان دانشکده دامپزشکی دانشگاه فردوسی مشهد، نمونه خون اخذ شد. پس از استخراج dna ژنومیک از خون کامل و طراحی پرایمرها و انتخاب قطعه ای از ژن tlr4، شامل بخشی از ژن قسمت خارج سلولی آن تحت عنوان نواحی غنی از لوسین (lrr)، که مستقیماً با مولکولهای وابسته به پاتوژنها یا آلرژنها درگیر می شود ، نسبت به تهیه محصول pcr به طول 1925bp اقدام شد. محصولات pcr توالی یابی شد و سپس با نرم افزار بیوانفورماتیک clc genomic workbench5 آنالیز شدند. سپس با آنالیز جایگاه های برشی آنزیم های اندونوکلئاز بر روی قطعه مورد مطالعه و بررسی مطابقت جایگاه snp های مشاهده شده با آن، در نهایت آنزیم xcei جهت هضم آنزیمی انتخاب شد. آنالیزهای مولکولی قطعه مورد مطالعه نشان داد که snp های عمدتا nonsynonymous ژن tlr4 با فراوانی متفاوت در جایگاهشان دیده شد. در واکنش هضم آنزیمی، تغییر الگوی برش آنزیمی بواسطه وجود snp شماره 495 در یکی از جایگاه های برشی آنزیم xcei ، مشاهده شد. به کمک این نتایج در کنار یافته های مطالعه قبلی (نقص در بیان ژن tlr4 و برهم کنش آن با لیگاند lps) و آنالیز پروتئین tlr4 متعاقب رخداد snpها میتوان به کمک نرم افزارهایی مثل icm و مدل سازی پروتئینی، عملکرد پروتئین tlr4 را در ارتباط با رخداد cadبررسی عمیق تری کرد تا پنجره ای برای یافتن نقش tlr4 در پاتوژنز پیچیده cadباز شود.